Una molecola può assorbire in punti diversi dello spettro, generando curve di assorbimento con picchi e zone in cui non vi è assorbimento. Nel grafico è riportata la quantità di luce assorbita in funzione delle lunghezze d'onda della luce:
Lo strumento è molto utilizzato per determinazioni quantitative, grazie alla legge di Lambert Beer. Per cominciare, se per la sostanza in esame il coeff. di estinzione molare è incognito, bisogna costruire una retta di taratura tra Assorbanza e Concentrazione. E' sufficiente preparare una serie di concentrazioni note della sostanza in analisi pura e disciolta in un solvente, azzerare l'assorbanza e quindi leggere le assorbanze delle varie concentrazioni note ponendo le rispettive cuvette nello strumento una dopo l'altra. La retta risultante sarà di questo tipo:
Ora per determinare la concentrazione incognita del campione basta prepararne una diluizione nello stesso solvente, determinare il valore di Assorbanza e, grazie alla retta creata, ricavare il relativo valore di concentrazione.
Da: http://www.tuttochimica.it/chimica_analitica_spettrofotometro.asp
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